不同光照周期对日本囊对虾生长、蜕皮和糖代谢的影响

本研究比较分析了不同光照周期(全黑暗D、光照:黑暗10L:14D、光照:黑暗14L:10D、全光照L)对日本囊对虾(Marsupenaeus japonicas)生长、蜕皮和糖代谢的影响。结果显示，随着光照时间的延长，日本囊对虾的存活率(SR)、特定生长率(SGR)和蜕皮率(MF)逐渐降低，到第49天时，L组日本囊对虾死亡率达100%。实验结束时，D组SR、SGR和MF显著高于10L:14D组和14L:10D组(P<0.05)，分别为(60.000±2.722)%、(6.966±0.686)%/d和(4.667±0.363)%/d，但10L:14D组和14L:10D组间的SR、SGR和MF差异不显著。不同光照周期对日本囊对虾体内蜕皮抑制激素(MIH)和蜕皮激素(EH)浓度有显著影响。第30天时，D组MIH浓度显著低于10L:14D、14L:10D和L组(P<0.05)，10L:14D和14L:10D组MIH浓度显著低于L组(P<0.05)，10L:14D和14L:10D组间差异不显著；第60天时，D组MIH浓度显著低于10L:14D和14L:10D组(P<0.05)，但2组间差异不显著；随着光照时间的延长，日本囊对虾体内EH浓度不断降低，第30天时，D组EH浓度显著高于10L:14D、14L:10D和L组(P<0.05)，10L:14D、14L:10D和L组相比差异不显著；第60天时，D组EH浓度显著高于10L:14D和14L:10D组(P<0.05)，但2组间差异不显著。不同光照周期显著影响日本囊对虾的糖代谢，不同处理组血清中的5-羟色胺(5-HT)、高血糖激素(CHH)和肝胰腺中的糖原磷酸化酶(GP)的变化趋势与上述MIH浓度变化趋势一致，而肝胰腺中糖原合酶(GS)的变化趋势与MIH浓度变化趋势相反。研究表明，日本囊对虾最适宜生长的环境为全黑暗状态。     

许氏平鲉仔鱼、稚鱼、幼鱼肠道微生物群结构特征

采集常规饲养的健康许氏平鲉1日龄仔鱼,9、20日龄稚鱼,54、95日龄幼鱼,运用Illumina MiSeq PE300平台,对其肠道微生物的16S rDNA V3~V4可变区进行高通量测序,共获得1039个运算分类单位、667个属。在丰度高于1%的菌属水平上,野生鱼肠道菌群丰度的平均值(86%)远高于幼鱼时期的平均值(73.5%)。不动杆菌属为仔鱼、稚鱼、幼鱼肠道中最优势菌属(丰度为26.2%~45.3%);短芽孢杆菌属次之。结合共有菌属分析获得11个核心菌群,芽孢杆菌属、短芽孢杆菌属、不动杆菌属、根瘤菌属等的丰度随仔鱼、稚鱼、幼鱼生长先升后降,均在54日龄时丰度最高;弧菌属则呈现相反的趋势(0.37%~12.41%),54日龄时丰度最低。仔鱼、稚鱼、幼鱼与野生个体肠道仅有14个共有菌属,短芽孢杆菌属、Massilia的最小丰度值分别是野生个体肠道中最大丰度值的9倍和32倍,差异明显。本研究揭示了许氏平鲉仔鱼、稚鱼、幼鱼肠道菌群结构特征及其发生、发育的过程,为苗种繁育阶段肠道生理健康调控提供理论依据。     

三疣梭子蟹C-JUN氨基末端激酶基因克隆及在病原胁迫后的表达特征分析

C-JUN氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)作为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)超家族的重要一员，在细胞增殖、凋亡和免疫应激等过程中发挥着重要作用。为深入研究JNK基因的免疫防御机制，本研究从三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)转录组数据库中筛选到JNK基因的EST序列，利用RACE扩增技术克隆得到该基因全长序列，命名为PtJNK，cDNA全长为3240 bp，开放阅读框(ORF)为1380 bp，编码459个氨基酸，具有TPY磷酸化位点的S_TKC保守结构域，是JNK基因家族典型特征。组织表达分布结果显示，PtJNK基因在所有组织中均有表达；Real-time PCR检测不同病原刺激下PtJNK基因的表达水平，结果显示，注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后，该基因显著下调表达(P<0.05)；而注射白斑综合征病毒(WSSV)后，该基因显著上调表达(P<0.05)。综上所述，PtJNK基因是一种广泛表达基因，且在不同的病原感染情况下，该基因的表达模式存在差异，在免疫防御过程中具有重要作用。     

基于不同空间插值法的黄海和东海北部游泳动物多样性空间分布研究

物种多样性空间分布是生态学研究的重要内容之一，空间插值法在该领域应用广泛。本研究以2017年5月黄海和东海北部游泳动物多样性为例，选取种类数(S)、Shannon-Weaver多样性指数(H′)、Pielou均匀度指数(J)和Margalef丰富度指数(d)来衡量该海域物种多样性，应用反距离加权法(Inverse distance weighted, IDW)、径向基函数法(Radial basis function, RBF)、局部多项式法(Local polynomial interpolation, LPI)、普通克里格法(Ordinary kriging, OK)和协同克里格法(Ordinary cokriging, COK)对上述4种多样性指数进行插值，通过jackknife检验的方法选择适合每种多样性指数的空间插值法。结果表明，对于4种多样性指数，COK结果均最好，而其他4种方法精度较低，且差别不大。COK预测结果表明，S和d都呈现出东南部高，北部次之，中部最低的格局。H′和J也是中部最低，在南部和北部海域差异不大。4种多样性指数在32?N以南海域的高值区范围大致相同。COK可以作为黄海和东海北部游泳动物多样性空间插值的方法。     

一种复合益生菌对凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力的影响

本研究选择1株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL-9、1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS-12、1株金丽假交替单胞菌(Pseudoalteromonas flavipulchra)CDM8,以1∶1∶1将其组成复合益生菌,各益生菌水体添加浓度为107 CFU/ml,进行为期30 d的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖实验。实验分为暂养期(7d)、益生菌处理期(15d)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)攻毒期(10 d)。结果显示,养殖水体中添加复合益生菌能显著增加水体和对虾肠道可培养细菌总数(P<0.05),攻毒实验结束时,实验组对虾累积存活率为(73.33±6.83)%,显著高于阳性对照组(25.33±15.43)%。对虾抗病基因热激蛋白70(Heat shock proteins 70,Hsp70)、β-1,3-葡聚糖结合蛋白-脂蛋白(Beta-1,3-glucan-binding protein-lipoprotein,βGBP-HDL)、脂多糖-β-1,3-葡聚糖结合蛋白(Lipopolysaccharide-β-1,3-glucan binding protein,LGBP)、抗菌肽Crustin在益生菌处理阶段均出现不同程度的上调,在攻毒阶段虽呈现各自不同的表达情况,但所有基因都经历了更大幅度上调。研究表明,水体中添加芽孢杆菌和假交替单胞菌组成的复合益生菌可提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力,对虾抗病力的提高可能与益生菌增加对虾肠道可培养细菌数量、抗病相关基因表达水平及过氧化氢酶(CAT)活性有关。     

胶州湾菲律宾蛤仔个体生长模型的构建与验证

为更好地掌握胶州湾菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)的动态生长情况，本研究基于动态能量收支(Dynamic energy budget, DEB)理论，利用python软件构建了菲律宾蛤仔的个体生长模型，以2018年4月24日~2019年1月9日观测的胶州湾海域叶绿素a和水温为强制函数，通过现场实验和已有文献报道获取模型参数，模拟了菲律宾蛤仔软体组织质量和壳长的生长情况，并根据胶州湾海域菲律宾蛤仔生长的实测数据对模型进行了验证。结果表明，构建的个体生长模型能够很好地模拟胶州湾海域菲律宾蛤仔软体组织干重和壳长的生长，软体组织干重和壳长的模拟值与实测值呈显著线性相关关系(P<0.01)，R2分别为0.9374和0.9168。敏感度指数最高的是阿伦纽斯温度TA和参考温度T1，如果TA和T1分别改变10%，菲律宾蛤仔软体组织干重增加高达8.86%。研究结果为后续开展基于生态系统动力学模型的养殖容量动态评估提供了基础模块和数据支撑。     

环境条件对1株假交替单胞菌脱氮效果的影响

从对虾养殖池中分离得到1株具有高效脱氨氮能力的菌株(2906)，根据菌株2906的16S rRNA序列分析，该菌与假交替单胞菌属Pseudoalteromonas tetraodonis的亲缘关系最近，命名为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)2906。利用不同C/N、pH、盐度的脱氮培养基，分析了环境条件对该菌株脱氮效率的影响，研究了葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、丁二酸钠、柠檬酸钠、乳糖和可溶性淀粉等不同碳源对菌株2906脱氮效果的影响。结果显示，菌株2906在C/N为15~20、pH为7~8、盐度为5~15时，具有良好的脱氨氮效果。应用柠檬酸钠为碳源，氨氮去除率达100%。在脱氮培养过程中，细菌生长与脱氮效率呈强相关性(相关系数R=0.94)。采用浸泡攻毒方法测试了该菌对幼虾的生物安全性，结果显示，该菌对幼虾的LC50为2.8?107 CFU/ml，表明该菌对对虾不具致病力。研究结果可为该菌的开发利用提供技术支持。     

山东主要刺参养殖区幼参肠道抗生素耐药菌及耐药基因分布特征

为解析目前刺参(Apostichopus japonicus)苗种携带耐药菌及耐药基因现状，本研究从烟台、威海、青岛3个刺参主要养殖区的6家养殖场采集了幼参，对其肠道内容物中常用抗生素的耐药菌数量、占比和种类进行检测。利用荧光定量PCR技术，对样本中4类抗生素的7种耐药基因分布情况进行分析。结果显示，所检测的6个采样点中均有6种抗生素耐药菌的检出，从耐药菌占比来看，耐药菌占比最高的种类是乙酰甲喹、萘啶酸和四环素耐药菌，占比分别为0.05%~40.06%、2.16%~39.94%和0.06%~23.15%，氟苯尼考、庆大霉素和链霉素耐药菌的占比均不高，占比范围为0.01%~4.15%。由所分离到的98株耐药菌的鉴定结果可以看出，可培养的抗生素耐药菌分为4门5纲30属，主要集中在弧菌属、芽孢杆菌属和嗜冷杆菌属，占检出率的15.30%、13.27%和12.25%。基于属水平的不同抗生素耐药菌种类的分布统计结果显示，各采样点耐药菌种类差异较大，而且弧菌属、芽孢杆菌属和嗜冷杆菌属中均存在同一菌属中有耐多种抗生素的情况。对6个样本7种抗生素耐药基因的丰度检测结果显示，同一类抗生素的不同耐药基因的含量差异显著，除氨基糖苷类抗生素耐药基因aadA的相对拷贝数比例和链霉素以及庆大霉素耐药菌占比之间存在显著相关性(P<0.05)外，其他抗生素耐药基因的丰度与耐药菌占比之间相关性不显著(P>0.05)。研究表明，苗期刺参中存在一定的携带耐药菌和耐药基因的风险。     

真鲷虹彩病毒引起养殖斑石鲷大规模死亡的研究

2017年8月，山东省烟台市某养殖场网箱养殖的斑石鲷(Oplegnathus punctatus)幼鱼突然发病并大量急性死亡。疾病调查显示，养殖海域水温为26℃~28℃；病鱼为4~5月龄，全长为(16.3± 1.6) cm，体重为(156.9±37.0) g；80万尾斑石鲷幼鱼2周内累积死亡率达90%以上，经济损失惨重。临诊检查发现，病鱼体表无明显损伤，但活力差、呼吸急促。剖检可见病鱼脾肿大、质地脆、易碎，肾糜烂，肝有出血点。组织切片观察发现，病鱼脾、肾造血组织中可见许多直径约为20 μm的肿大细胞，肿大细胞内含有大量直径约为145 nm、呈六边形的病毒颗粒。用过滤除菌的病鱼脾组织匀浆液，腹腔注射感染健康斑石鲷，感染组14 d内累积死亡率达95%。人工感染病鱼表现出与自然发病鱼类似的外观症状，且在脾、肾组织切片中也可观察到大量的肿大细胞及相似的病毒粒子。使用特异性PCR引物，从自然发病鱼和人工感染病鱼的肝、脾和肾组织中均检测到鱼类虹彩病毒的高强度感染。克隆、测序得到了1362 bp的病毒主要衣壳蛋白基因(MCP)，序列比对显示，该病毒的MCP序列与真鲷虹彩病毒(RSIV) RIE12-1的相应序列完全相同。构建的虹彩病毒系统发育树也显示，该病毒属于虹彩病毒科肿大细胞病毒属RSIV类群，是RSIV的一个分离株。本研究首次证实RSIV可以导致斑石鲷大规模死亡，研究结果为诊断和防治斑石鲷病毒病提供了重要参考。     

黄条仔稚幼鱼消化酶活性变化研究

为了解黄条(Seriola aureovittata)早期发育阶段的消化生理特性,测定了黄条胚胎、仔稚幼鱼阶段脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶和碱性磷酸酶活性变化。结果显示,在黄条仔鱼出膜前胚胎阶段,即能检测到脂肪酶、淀粉酶和碱性磷酸酶活性;初孵仔鱼体内(1 d)初次检测出胰蛋白酶的活性。脂肪酶和碱性磷酸酶比活力在仔鱼孵化后迅速增强(P<0.05),在4 d开口时,2种酶比活力达最高值;淀粉酶比活力在7 d时达最大值;胰蛋白酶比活力在仔鱼阶段缓慢上升,15 d时比活力最大。稚鱼阶段内脏团中脂肪酶、碱性磷酸酶和胰蛋白酶活性基本维持稳定,幼鱼阶段内脏团脂肪酶、碱性磷酸酶和胰蛋白酶活性都呈现上升趋势;稚鱼和幼鱼阶段内脏团中淀粉酶活性下降并基本稳定于较低水平。研究表明,黄条仔稚幼鱼发育过程中,各种消化酶活性变化明显,且与其发育阶段和食性密切相关。在尚未摄食饵料的早期仔鱼体内已存在消化酶,认为其是母源传递而来,不是由外源性饵料所致;幼鱼阶段内脏团脂肪酶、碱性磷酸酶和胰蛋白酶比活力明显提高,这反映出随苗种生长发育,其肠道结构和消化机能逐渐完善,并且对脂肪、蛋白质的需求逐渐增强。